液相色譜儀系統(tǒng)使用介紹
特高壓電力旗下的油色譜分析儀可以幫助眾多電力工作者更加方便的進(jìn)行各類(lèi)電力測(cè)試。
高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。下面將介紹它們各自的組成和特點(diǎn)。
1、進(jìn)樣系統(tǒng)一般采用隔膜進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣室完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量恒定。這有利于提高分析樣品的重復(fù)性。
2、輸液系統(tǒng) 本系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相儲(chǔ)液器和梯度計(jì)三部分。高壓泵的一般壓力為l。47~4.4X107Pa,流量可調(diào)穩(wěn)定。當(dāng)高壓流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí),可降低樣品在柱內(nèi)的擴(kuò)散效應(yīng),加快柱內(nèi)移動(dòng)速度,提高分離度,回收樣品。有利于保持樣品的生物活性。流動(dòng)相存儲(chǔ)誤差和梯度儀可以根據(jù)固定相和樣品的性質(zhì)改變流動(dòng)相,包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度和pH值,或使用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑。這使得多種物質(zhì)(即使只有一組差異或異構(gòu)體)可以有效分離。
3、分離系統(tǒng) 系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱的長(zhǎng)度一般為10-50cm(需要兩根時(shí),可在兩者之間加一根連接管),內(nèi)徑為2-5mm,采用優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金制成。有粒徑為5-10μm的固定相(由基質(zhì)和固定液組成)。固定相中的基體由機(jī)械強(qiáng)度高的樹(shù)脂或硅膠制成,它們都具有惰性(如堿性硅膠已被去除)、孔隙率(孔徑可達(dá)1000?)和大比表面積,耦合用機(jī)械包被(同氣相色譜固定相的制備),或各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(zhǎng)度的碳鏈烷基)的化學(xué)偶聯(lián),等)或配體有機(jī)化合物。所以,這種固定的相對(duì)結(jié)構(gòu)具有很好的選擇性。例如,在多孔硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,可以分離成纖維細(xì)胞中的糖蛋白。另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床容易達(dá)到均勻致密的狀態(tài)。很容易減少渦流擴(kuò)散效應(yīng)。基體粒徑小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)傳質(zhì)短。這些有利于減小帶寬和提高分辨率。根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒徑小且板的理論數(shù)N越大。這進(jìn)一步證明基質(zhì)粒徑越小會(huì)提高分離度。此外,高效液相色譜恒溫器可將溫度從室溫調(diào)節(jié)到60℃,通過(guò)提高傳質(zhì)速率縮短分析時(shí)間。,它可以提高色譜柱的效率。
4、檢測(cè)系統(tǒng) HPLC常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、折光率檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器。
(1)紫外檢測(cè)器 該檢測(cè)器適用于紫外光(或可見(jiàn)光)對(duì)具有吸收特性的樣品的檢測(cè)。其特點(diǎn):應(yīng)用范圍廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等);靈敏度高(檢出限為10-10g/ml);線性范圍寬;對(duì)溫度和流量變化不敏感;可以檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。
(2) 示差折光檢測(cè)器可以對(duì)所有與流動(dòng)相檢測(cè)器檢測(cè)折射率不同的樣品組分使用示差折光檢測(cè)。目前,大部分碳水化合物化合物的檢測(cè)都采用這種檢測(cè)系統(tǒng)。該系統(tǒng)通用性強(qiáng),操作簡(jiǎn)單,但靈敏度低(檢出限為10-7g/ml),流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化。因此,它既不適合痕量分析,也不適合梯度洗脫樣品的檢測(cè)。
(3)熒光檢測(cè)器對(duì)具有熒光的物質(zhì),在一定條件下,發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和物質(zhì)的濃度因此,本檢測(cè)器僅適用于熒光有機(jī)化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類(lèi)、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測(cè)定,其靈敏度非常高(檢出限為10-12~10- 14g/ml),可用于梯度洗脫工作的痕量分析和檢測(cè)。
5. 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 該系統(tǒng)可以采集、存儲(chǔ)、顯示、打印和處理測(cè)試數(shù)據(jù)以分離樣品,可以正確地進(jìn)行制備或鑒定工作。