高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。下面將介紹它們各自的組成和特點。

1、進樣系統一般采用隔膜進樣器或高壓進樣室完成進樣操作，進樣量恒定。這有利于提高分析樣品的重復性。

2. 輸液系統 本系統包括高壓泵、流動相儲液器和梯度計三部分。高壓泵的一般壓力為l。47～4.4X107Pa，流量可調穩定。當高壓流動相通過色譜柱時，可降低樣品在柱內的擴散效應，加快柱內移動速度，提高分離度，回收樣品。有利于保持樣品的生物活性。流動相存儲誤差和梯度儀可以根據固定相和樣品的性質改變流動相，包括改變洗脫液的極性、離子強度和pH值，或使用競爭性抑制劑或變性劑。這使得多種物質（即使只有一組差異或異構體）可以有效分離。

3、分離系統 系統包括色譜柱、連接管、恒溫器等。色譜柱的長度一般為10-50cm（需要兩根時，可在兩者之間加一根連接管），內徑為2-5mm，采用優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金制成。有粒徑為5-10μm的固定相（由基質和固定液組成）。固定相中的基體由機械強度高的樹脂或硅膠制成，它們都具有惰性（如堿性硅膠已被去除）、孔隙率（孔徑可達1000?）和大比表面積，耦合用機械包被（同氣相色譜固定相的制備），或各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度的碳鏈烷基）的化學偶聯，等）或配體有機化合物。所以，這種固定的相對結構具有很好的選擇性。例如，在多孔硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）后，可以分離成纖維細胞中的糖蛋白。另外，固定相基質粒小，柱床容易達到均勻致密的狀態。很容易減少渦流擴散效應。基體粒徑小，微孔淺，樣品在微孔區傳質短。這些有利于減小帶寬和提高分辨率。根據柱效理論分析，基質粒徑小且板的理論數N越大。這進一步證明基質粒徑越小會提高分離度。此外，高效液相色譜恒溫器可將溫度從室溫調節到60℃，通過提高傳質速率縮短分析時間。，它可以提高色譜柱的效率。

4、檢測系統 HPLC常用的檢測器有紫外檢測器、折光率檢測器和熒光檢測器。

(1)紫外檢測器 該檢測器適用于紫外光（或可見光）對具有吸收特性的樣品的檢測。其特點：應用范圍廣（如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等）；靈敏度高（檢出限為10-10g/ml）；線性范圍寬；對溫度和流量變化不敏感；可以檢測梯度溶液洗脫的樣品。

(2) 示差折光檢測器可以對所有與流動相檢測器檢測折射率不同的樣品組分使用示差折光檢測。目前，大部分碳水化合物化合物的檢測都采用這種檢測系統。該系統通用性強，操作簡單，但靈敏度低（檢出限為10-7g/ml），流動相的變化會引起折光率的變化。因此，它既不適合痕量分析，也不適合梯度洗脫樣品的檢測。

(3)熒光檢測器對具有熒光的物質，在一定條件下，發射光的熒光強度和物質的濃度因此，本檢測器僅適用于熒光有機化合物（如多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等）的測定，其靈敏度非常高（檢出限為10-12~10- 14g/ml)，可用于梯度洗脫工作的痕量分析和檢測。

5. 數據處理系統 該系統可以采集、存儲、顯示、打印和處理測試數據以分離樣品，可以正確地進行制備或鑒定工作